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牛奶蛋白質測定的優化操作

來源: http://www.yw999333.com/  類別:技術文章  更新時間:2013-12-11  閱讀

      牛奶蛋白質是牛奶檢測的重要指標,作為生命的物質基礎之一,蛋白質在催化生命體內各種反應進行、調節代謝、抵御外來物質入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關重要的作用。目前,牛奶蛋白質的測定方法主要為國標凱氏定氮法,是有機化合物含氮量測定最常有的方法,是蛋白質測定的經典方法,即使用蛋白質測定儀來進行測定。蛋白質測定儀適用樣品廣泛,測定結果準確,重現性好,但試劑消耗量大,檢測時間長,消化約6~8 h,且消化后樣品需定容,定容時容量瓶未搖勻,很容易出現結晶現象,費時費力。
      為改善國標檢測方法樣品稱樣量大,消化時間長,消化后的樣品需定容,操作步驟多的現狀,本文對樣品的稱樣量進行了優化,經典凱氏定氮法液體樣品的稱樣量為1~25 mL,因牛奶樣品均勻度較好,故本方法將樣品的稱樣量優化為1.0~1.5g。將樣品的稱樣量從10g減小到1.5g,其他檢測條件不變。如果取樣具有代表性,改變樣品的稱樣量,對檢測結果的影響不大。
      樣品消化時間主要包括氧化時間,沸騰時間。氧化時間中濃硫酸將有機樣品中的碳轉化成CO2(這時的溶液為黑色),氫元素轉化為H2O,氮元素轉化為銨鹽。氧化完畢后,溶液變澄清,進入沸騰時間,在沸騰30 min后,樣品中氮元素全部轉化為氨,氮的回收率達到最高。樣品消化結束后,消化管中應剩余5-6 mL濃硫酸,如果消化時硫酸消耗完了,會造成氮的損失。在消化期間如果硫酸加入量少,樣品會出現結晶情況,因此,硫酸用量應適當,而硫酸用量取決于樣品量,本方法中硫酸量的優化參照的為國標方法,國標方法10 g樣品濃硫酸的用量為20 mL,即1 g樣品硫酸消耗的量為2 mL,現將樣品的稱樣量減小為1~1.5 g,硫酸的消耗量應不大于3 mL,為保證樣品消化完后濃硫酸的量有剩余,故將硫酸的量定優化為8.5 mL。

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